Културна среда и опазване на културите на фитопатогенни патогени

За чисти гъби култури - факултативни сапрофити и факултативни паразити, поддържащи тяхната жизнеспособност с цел по-нататъшно изследване, се използват различни хранителни среди. Тези среди се разграничават между твърди и течни с известен и непознат химичен състав, естествени и изкуствено приготвени. Изборът на определен вид хранителен субстрат зависи от нуждите на гъбичния организъм и целите на изследването. Например, при изучаване на растителен имунитет, за да се оцени устойчивостта на растението гостоприемник към токсичните вещества на патогена и ефекта от неговото освобождаване върху растежа на патогенните форми, е необходимо да се получи обилна спорулация.

В процеса на експериментална работа се избират специфични среди. Гъбата се засява едновременно на различни среди в петриевите съдове (в три екземпляра) и се поддържа при оптимални за развитието му температури. Наблюденията се извършват в продължение на 12-15 дни над растежа и развитието на гъбата (енергия на растежа, начало и характер на спорообразуване, плътност на мицела и др.), В резултат на това се избира най-подходящата среда. Когато използвате стандартни синтетични среди, техният състав може да бъде променен чрез добавяне и изключване на различни химически компоненти.

Често има нужда да се намерят среди, в които гъбата расте и се развива по-добре, отколкото в природата. Това може да се постигне поради факта, че след стерилизация в околната среда конкурентните микроорганизми се унищожават, а съставните му вещества претърпяват дълбоки биохимични промени, които допринасят за по-добро усвояване от някои гъбички. Обикновено това са агарови среди с отвара или инфузии (екстракти) от растението гостоприемник или стъбла на детелина. И така, 100 г пресни или 50 г изсушени органи, които хранят растенията от гъби, се приемат в 1 литър вода. Масата се смачква, вари един час, първоначалният обем течност се възстановява, филтрира, след което се добавя 2-2,5 агар-агар, разтваря се и се стерилизира (М. К. Хохряков, 1969).

По време на отглеждането на гъби, паразитиращи върху дървесни растения, И. И. Мийкевич използва естествени хранителни среди, приготвени по тази рецепта. Ситно нарязаните клони на някои дървесни видове (200 g) се заливат с вода (1 L) и се държат 12 часа при 80 ° С, след което инфузията се филтрува и се прибавя агар-агар (2.5). След това средата се стерилизира в продължение на два часа с течна пара в апарат на Кох. При специални проучвания бяха приготвени екстракти от различни сортове, които бяха подравнени по концентрация (1 по отношение на сухото вещество) чрез последователно разреждане. Възможно е да се използват подобни естествени среди в по-висока концентрация.

За определени систематични групи от патогенни гъби много изследователи са подбрали естествени хранителни субстрати и са идентифицирали среда с известен химичен състав. По този начин е експериментално установено, че тези видове от рода Fusarium растат добре на варени оризови зърна - гъби от рода Piricularia развиват изобилно спорообразуване върху агарова среда с отвара от пшенични зърна или кореноплодни моркови. Съставите от твърди хранителни среди за отделни видове и групи гъби са показани в таблица 20.

Когато подготвяте медиума, трябва да имате предвид следните обстоятелства:

1. гъбичките обикновено растат по-добре в среда, богата на въглехидрати, но отглеждането им на такива среди може да намали споролацията за дълго време-
2. повечето гъби предпочитат слабо кисела реакция (pH 6,0-6,5), докато бактериите предпочитат неутрална (pH 7,0) или леко алкална-
3. въглехидратите и протеините в кисели и алкални разтвори се унищожават при нагряване, така че те трябва да бъдат умерено стерилизирани или добавени отделно-
4. агар се разтваря в половината от нормата вода за 1-2 часа, а хранителните вещества в останалата вода, след което компонентите се смесват-
5. агар не се втвърдява в много кисела или алкална среда-
6. пептонът може да бъде изключен главно от медиите за гъби-
7. преварена вода трябва да се предпочита дестилирана, тъй като първата съдържа полезни микроелементи за гъбички от рода Phytophthora по-добре използвайте дестилирана вода-
8. за среда, съдържаща растителен материал, тя е предварително изтеглена при ниски (картофен агар) или високи (картофено-декстрозен агар) температури.

В някои случаи (при изследване на токсични секрети на патогени, ензими и др.) Се използват течни хранителни среди. Например токсични ефекти на секретите Deuterophoma tracheiphila той е изследван върху среда, приготвена чрез настояване върху смляните издънки на растението гостоприемник (200 г издънки на 100 см3 вода). За смъртни гъби се препоръчва следният състав: 0,03 g K2S04 - 0,01 g NH4NO3 - 10,0 g декстроза (или малтоза) - 0,01 g CaCl2 - 0,01 g Mga (P04) 2-4H20 и вода 100 cm3.

За различни изследвания за биологията на гъбичките и устойчивостта на растенията възниква необходимостта от дългосрочно съхранение на чисти култури. След съхранение обаче редица патогенни гъбички променят морфологични и културни характери и понякога губят патогенни свойства. Следователно, преди провеждането на експерименти с гъби, взети след дълготрайно съхранение в чиста култура, е необходимо да се възстанови тяхната патогенност чрез провеждане на пасажи през растението гостоприемник.

Съставът на хранителни среди за отглеждане на фитопатогенни гъби

Широко разпространен начин за поддържане на чисти гъби култури е тяхното периодично повторно повторно презасяване върху пресни хранителни среди. Повечето култури се пресаждат 2-3 пъти годишно. При презасаждане се пренасят главно спори, а при форми, които не образуват спори, мицелите от пределната зона на колонията.

Повторното размножаване се извършва на два повторения и 3 екземпляра от всяка гъбна култура се оставят за съхранение, преброяване и повторно подреждане на предишния срок. Единият от новите повторни посева се използва само за бъдещо повторно повторно подреждане, другият - за скрининг по време на експериментална работа.

За дългосрочно съхранение на гъбите е по-добре да използвате нишестени и целулозни среди без захар. Редица полусафитни гъби са добре запазени на стерилен естествен материал (например гъби от рода Cytospora върху клоните на растението гостоприемник) - в този случай най-подходяща е температура от 4-5 ° C. Дълбокото охлаждане (приблизително - 20 ° С) задоволява задоволително жизнеспособността на гъбите за много дълъг период.

Гъбните култури също могат да се консервират под минерално масло, след лиофилизация (сушене чрез замразяване при понижено налягане) и под течен азот в ампули. Ако гъбите могат да издържат на пълна обработка, тогава те ще бъдат жизнеспособни 10 и повече години. Използването на тези методи обаче изисква тромаво и скъпо оборудване..

При нормални условия колекцията от гъби се съхранява най-добре в широки епруветки в коса среда за растеж, затворена с памучни тапи. Въпреки това, пазете се от увреждане на реколтата от кърлежи (видове труд) новакglyphus и Tarsonemus), особено в южните райони и през лятото при умерен климат. Пробивайки се в епруветка, колби и петри, те ядат култури, заразяват ги с бактерии и заразяват.

Има много начини да се справите с тези акари. Но на първо място е необходимо да се спазва общата хигиена, да се вземат мерки, за да се гарантира, че насекомите не летят в лабораторията, бъдете внимателни при работа с органичен материал и с почва. Всички нови материали трябва да бъдат внимателно инспектирани при получаването им. Ако е възможно, трябва да има отделни помещения за чисти и мръсни материали..

Достатъчно плътните памучни запушалки обикновено са непромокаеми за кърлежи и подаването на въздух в културата не се нарушава. За по-голяма гаранция, коркови тапи могат да бъдат третирани с отрови, които имат пагубен ефект само върху кърлежи. Използването на тъкан хартия също се препоръчва. За целта след запушване на ръба на тапата те изгарят в пламъка на горелката и я покриват с лепкав топъл желатин с меден сулфат (меден сулфат - 20, желатин - 20, вода - 60). След това това покритие се фиксира в края на тръбата с тъкан хартия. След изсушаване излишната хартия се изгаря. Такава хартия е много тънка с пори, което предотвратява проникването на акари, осигурява достъп на въздух. По същия начин можете да запушите колбите, но гумените тапи трябва да бъдат извадени, а хартиената хартия да се стерилизира преди употреба..

Полезно е също така да затворите всички колби, чаши и епруветки със замърсен материал при получаване на хартия.

Всички култури трябва да бъдат номерирани и регистрирани на специални карти, където се записва номерът и името на културата, къде и къде е разпределена, датата на разпределение, метода на изолиране, името на медиите, използвани за повторно повторно подреждане, резултатите от наблюденията за растежа на патогена в чиста култура и отбелязани функции.