Методика за събиране и съхранение на проби от фитопатогенни гъби и повредени растения

Събиране и съхранение на проби от повредени растения и гъби

Проби от растения с добре определени признаци на заболявания и техните патогени подлежат на събиране. Тревистите растения се берат в тяхната цялост, включително цветя, плодове и корени - от дървета и храсти - главно клони с листа. Обикновено се събират части от растения, които имат признаци на увреждане под формата на плака, петна, подложки, подуване, деформации, язви и др., Както и растения без видими признаци на паразита, но изсъхващи или с внезапно разпадащи се листа.

Проби от болни растения се събират от момента на покълването до прибирането на реколтата. Обектите на фитопатологичните изследвания трябва да бъдат растения, растящи в полето, градината, зеленчуковата градина, поляната и гората. Необходимо е също да се изследват неразработените парцели - девствена почва, угар, блатата и храсталаците, тъй като много диви растения служат като междинни гостоприемници и преносители на болести от култивирани растения. В същото време трябва да се изследват презимуващите части на растенията - етапите на зимуване (перфектни и несъвършени) на много патогени, които са източник на нова инфекция в началото на вегетационния сезон, могат да останат върху тях.

През зимата е препоръчително да се събират засегнатите части от растенията при изследване на градини, както и зеленчукови магазини и посадъчен материал.

За да се получи спорообразуване от склеротия, недоразвита перитезия, различни строми и други неспорообразуващи форми на гъбички, заедно с части от засегнатите растения, М. К. Хохряков (1969) препоръчва да ги поставите в касетите Kleban от зима до зима. Последните са миниатюрни уплътнения, върху дървена рамка от които се изтегля мрежа от капрон или неръждаема тел. Тестовата проба (листа, стъбла и др.) Се поставя в касета с 2 рамки. Между половинките на двойно сгънатата еднослойна филтърна хартия, заедно с етикет, написан върху пергамент с обикновен молив, се връзва касета и се оставя на повърхността на почвата до пролетта. Важно е да поставите касетата, така че гъбата в нея да бъде изложена на всички природни фактори: намокряне и сушене, замръзване и размразяване, инсолация и потъмняване и др..

За презимуване при естествени условия гъбата се поставя под формата на чисти култури в епруветки, чиито памучни запушалки се обвиват с пергаментова хартия или калка, в горния край се затягат с гума. В други случаи снопове от тревисти растения се оставят за зимуване, обесвайки ги от летвите.

Пробите от засегнатите растения веднага след събирането се поставят в ботаническа папка или мрежа и се отделят един от друг с филтър или вестник. Ако пробите са увяхнали, те се изправят внимателно, а тези, които не могат да бъдат вградени в ботаническата мрежа (клони, грудки, плодове и др.), Се увиват в хартия. Всяка проба трябва да бъде снабдена с етикет, който указва мястото и датата на събиране, вида и сорта на растението, както и името на колектора.

Ако пробите са предназначени за хербарий, тогава те се поставят в преса за балиране, предварително разделена една от друга със слой хартиена подложка. Като мокра, освобождаващата хартия се заменя със суха хартия. В случаите, когато пробите не могат да бъдат изсушени (сочни плодове, кореноплодни култури и др.), Те се фиксират в консервиране на течности. Такива течности са алкохол (70-и), формалин (5-ти), смес от алкохол с формалин, разтвори на натриев хлорид (8-9-и) или меден сулфат (1-ви). Пробите, поставени в стъклени съдове, се заливат с тези течности..

За по-дълго съхранение има няколко рецепти. Най-често срещаната смес от меден сулфат (CuS04-5H20) - 180 g с негасена вар (CaO) - 180 g и вода - 22,7 литра. Медният сулфат се разтваря за една нощ в 2 L вода. Лаймът се гаси в 20,7 литра вода и се прекарва през тънко сито. Ако няма бърз вар, тогава можете да вземете 272 g гасена вар Ca (OH) 2 и внимателно да изсипете разтвора на меден сулфат в варовото мляко. Това дава най-фината суспендирана утайка. Разтворът се използва веднага след приготвянето..

Knop решение съставен от калциев нитрат [Ca (N03) 2] - 0,5 g, калиев нитрат (KNO3) - 0,125 g, магнезиев сулфат (MgS04-7H20) - 0,125 g, калиев фосфат (K2HPO4) - 0,125 g, железен хлорид (FeCl3 ) 5-та - 1 капка и дестилирана вода - 1 л.

Основният консервант за музейни проби е съставен от формалдехид (40-ти) - 25 мл, алкохол (95-ти) - 150 мл и вода - 1 л.

За да се запази зеленият цвят на пробите, те се поставят във вряща смес от 1 част ледена оцетна киселина, наситена с кристален меден ацетат, и четири части вода, кипват се 1-2 минути, докато зеленият цвят се върне, и след това се съхраняват в 5-ти разтвор формалин.

Друг задоволителен метод е материалът да се постави в 5-ти разтвор на меден сулфат за най-малко 6 часа и не повече от 24 часа. След това пробите се промиват с вода и се съхраняват в разтвор на сярна киселина (5-6302) - 2 ml с 1 литър дестилирана вода.

Консервант на Геслер за цветните плодове те се състоят от цинков хлорид (50 g), 40% формалдехид (25 ml), глицерин (25 g) и вода (1 l). За оцветени гъби се използват следните състави: ако пробата съдържа пигменти, неразтворими във вода - живачен ацетат (10 g), ледена оцетна киселина (5 ml) и вода (1 l) - при наличие на водоразтворими пигменти - живачен ацетат (1 g), неутрален оловен ацетат (10 g), ледена оцетна киселина (10 ml) и 90-и алкохол (1 l) или цинков сулфат (25 g), 40-ти формалдехид (10 ml) и вода (1 l ).

За да се избегне изпаряването на течности, бурканите с неподвижни проби се затварят със смлени запушалки, обикновените запушалки се пълнят с парафин. Към всеки буркан е прикрепен етикет..

Приготвят се микроскопични препарати с лактофенол и некол. Лактофенолът с анилин синьо служи като основен консервант за постоянни препарати, които могат да бъдат запечатани с лак за нокти (по-добре е да нанесете няколко тънки слоя). Първият слой трябва да е от безцветен лак, в противен случай багрилото от лака прониква в лактофенол. Последният слой асфалтов лак трябва да даде голяма здравина. Загряването на препарата преди нанасяне на покривка ускорява оцветяването. Сухият прахообразен материал първо трябва да се навлажни с етилацетат.

Неколските препарати често се правят чрез изучаване на гъбички, растящи на повърхността на субстрат. Некол или подобен препарат от целулозен ацетат се разрежда с ацетон до консистенцията на глицерола. Малка капка от тази течност се поставя върху колония от гъбички и се изсушава - това обикновено отнема 15-30 минути. Тънкият безцветен филм, образуван с гъбата, затворена в него, след окончателното изсъхване, се отстранява със скалпел и се поставя между две покривки в чист глицерин.

Някои гъби образуват нежен конидиален апарат. За да се направят добри препарати, се използват стъклени култури. В този случай е много важно да се спазват условията за стерилност и работата се извършва при стерилни петри, чиято повърхност се избърсва с алкохол, а всички инструменти, покривки и пързалки са старателно стерилизирани.

За да създадете културни блокове върху стъклени пързалки, парче с размери 7 mm2 се изрязва от агар в чаши на Петри, инокулира се с минимален брой спори от всяка страна, покрива се с капак и се поставя във влажна камера (устройството на камерата е описано по-долу). Когато културата достигне зрялост, част от спорите и носещите спори структури се прикрепват към стъклата и покриват чашите. Агарният блок се отстранява и препаратите се приготвят чрез добавяне на проби от лактофенол със структурите на гъбата върху стъклени пързалки и покрити с покрив, който се фиксира. Избягвайте замърсяването на въздуха чрез внимателно нагряване.

Методът на използване на покривки осигурява растежа на гъбичките в центъра им. За целта напълнете чинията на Петри с подходяща среда и оставете да замръзне. След това направете два диаметрални разреза на агар под прав ъгъл със набрашнен скалпел. Получените агарови триъгълници се повдигат и под всеки от тях, от краищата, се слагат изгорели покривки, които след това се заменят. Чашата е обърната и разположението на чашите, видимо през стъклото на чашата, е обградено с восъчен молив, в центъра на чашите четириъгълни секции, обвързани с молив, със страни 6-8 мм. След това чашата отново се обръща, ненужните парчета агар се изрязват и отстраняват, докато кръглите квадратчета блестят през агара. Средата се инокулира и плаката се поставя в инкубатор. В крайна сметка гъбата расте и се разпространява върху отворената повърхност на всяка чаша, както може да се види под бинокъл. При достатъчно разпространение на гъбата покривките се отстраняват с изрязване на заобикалящия агар (увреждайки хифите, ако е необходимо) и се приготвят по обичайния начин.

Ако е необходимо да се изпратят пресни проби, процедирайте по следния начин: веднага след събиране те се поставят в такива условия, за да не се влошат на пътя. Стъблата и резниците се изпращат в пресен, леко влажен мъх, плодовете се увиват в хартия и се прехвърлят с помощта на стърготини и др. Малки проби се изпращат в хартиени торби. Не можете да използвате пластмасов филм за дългосрочно съхранение и пренасяне на проби, тъй като торба с такъв материал създава много влага и пробите бързо изгниват.